二氧化碳培养箱中的微生物往往会对培养的结果产生一定的影响,常见的微生物处理方式包括物理过滤和灭菌,今天给大家说说灭菌处理。
灭菌就是 杀灭或清除传播媒介上的所有微生物(包括芽胞),使之达到无菌程度。经过灭菌的物品称“无菌物品”,培养箱内的无菌处理是指杀灭所谓微生物、病毒等,彻底避免环境对样本的影响,以及消除不同样本之间的交叉污染。根据不同的去除对象以及应用环境需求,采用有效的方法。
根据微生物的抵抗能力不同,可将微生物分为如下几类:
细菌繁殖体:易被一般的消毒剂杀灭,一般革兰氏阳性细菌对消毒剂较敏感,采用化学消毒效果较为明显;革蓝氏阴性杆菌则常有较强的抵抗力,一般的化学消毒效果不明显,但对热敏感,采用热力学方法效果明显。
细菌芽孢和真菌芽孢:有厚厚的孢子壁,对化学消毒剂有较强的抵抗力,一般的化学消毒对芽孢效力有限;消毒能力强的化学试剂对芽孢有一定的杀灭作用,但对浓度、处理方法等要求严格;常见的方法是采用热力学方法。
病毒:种类较多,不同病毒种类对外界的抵抗能力不同,化学试剂消毒的效果也不相同,RNA活性受温度影响明显,一般采用热力学方法去除。
真菌:普遍对环境抵抗能力强,一般的紫外消毒方式和化学试剂消毒达不到预期的效果,通常采用热力学方法处理,煮沸或使用高压灭菌灯。
培养箱内常见的热力学灭菌方法包括干热灭菌和湿热灭菌。
①干热灭菌:将箱体内加热到120℃以上,湿度为20% 以内,持续一定的时间,通过高温使蛋白质及核酸变性失活,达到杀灭的目的。干热140℃,2-4小时,是较为理想的灭菌方式,可以起到彻底灭菌的作用。。
②湿热灭菌:湿热灭菌指温度超过100 ℃后水转变为水蒸汽并产生高压强对微生物进行高压及穿透性导热灭菌,通常使用120 ℃通过高压灭菌器进行灭菌才能达到效果。而培养箱无法承受高压,所以使用90℃湿热灭菌因温度低于100 ℃而无法达到理想的湿热灭菌效果。
由此可见,培养箱采用干热高温灭菌是目前一种可行且效果极佳的灭菌方法,能彻底消灭细菌、真菌、孢子、病毒等微生物且没有二次污染。最好一个季度采用一次高温灭菌,消除潜在的污染风险。
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